Instruções para o exame: Pesquisa de HLA para Síndrome de Behçet.

Conservação

• (Sangue)- Colher 4 ml de sangue em um tubo com EDTA (tampa roxa) - estável em temperatura ambiente por 7 dias, refrigerada por 30 dias e congelada (-20°C à -80°C) por tempo indeterminado.

Critérios de Rejeição

• Amostras congeladas.
• Presença de coágulo ou hemólise grosseira.
• Amostras coletadas em conservante inadequado.

Critérios de Restrição

• Amostra com volume inferior ao solicitado.
• Avarias no tubo e/ou recipiente do material enviado.
• Amostra fora do prazo de viabilidade
• Amostras sem a correta identificação.
• Falta de requisição médica.
• Termo de consentimento assinado pelo paciente ou responsável.

Observações

• Para a realização deste exame é necessário preenchimento de questionário em anexo.
• Amostras com grau leve de coagulação podem ser aceitas com restrição.
• Amostras em tubo de Heparina podem ser aceitas com restrição.

Documentos Obrigatórios

• Termo de Consentimento
• Formulário de Requisição

Metodologia

A metodologia usada no exame é PCR-SSOP.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). A tipagem HLA pelo método de “Polymerase Chain Reaction – Reverse Sequence Specific Oligonucleotide Probe” (PCR-SSOP) é baseada na amplificação específica de éxons do gene HLA utilizando primers biotinilados. Após a amplificação, os fragmentos são hibridados com beads marcados com sondas específicas. Após isto, um marcador fluorescente é acrescentado à reação para identificação das beads positivas e negativas. A leitura é realizada em um citômetro de fluxo que identifica a positividade de cada bead bem com sua especificidade. O resultado é analisado utilizando um software que interpreta a positividade de cada bead e compara com um banco de dados e seleciona o resultado da amostra.

Limitações do exame

A técnica de PCR-SSOp “Polymerase Chain Reaction – Reverse Sequence Specific Oligonucleotide Probe” resulta em tipificações HLA em média resolução.